棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达

中文关键词: 抗菌肽  Piscidin  基因克隆  原核表达  棕点石斑鱼

中文摘要:

      以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示，该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员，将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793)，推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征：（1）预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高，在60%~95%之间；（2）推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His；（3）成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明，该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelus akaara piscidin like peptide（ACE78290）、斜带石斑鱼Epinephelus coioides Piscidin-like peptide（ACE78291）以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条Piscidin cDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽，等电点12.48，Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis(EF)，并在大肠杆菌E. coli Origami(DE3)中成功表达出融合蛋白，以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达，4 h可获得大量表达，目的蛋白以包涵体形式存在。

英文摘要: